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【仪电剖析】饲猜中氨基酸含量的测定
公布工夫:2021-05-27

本办法以L-赖氨酸和L-蛋氨酸为例,对饲料等样品中十几种氨基酸的测定办法做一扼要介绍。

一、办法原理

对氨基酸举行柱前衍生后,在254nm波长下,以保存工夫定性,接纳外标法剖析时,需做尺度曲线,无需参加正亮氨酸内标物。


二、所需仪器和试剂

仪器:

a.高效液相色谱仪含紫外检测器

(上海仪电剖析仪器有限公司LC220);

b. 蒸发回流安装;

c.万分之一天平;

d.恒温水浴锅;

e.实行室常用玻璃仪器。

试剂:

a.L-赖氨酸和L-蛋氨酸尺度品;

b.甲醇(色谱纯);

c.乙腈(色谱纯);

d.醋酸钠(剖析纯);

e.乙酸(剖析纯);

f.正己烷(色谱纯);

g.盐酸(剖析纯);

h.苯酚(剖析纯)。

三、实行办法

1.色谱条件


2.试剂配制

2.1 样品前处置溶液的配制

6mol/L的盐酸溶液:将盐酸溶液(36%-38%)与超纯水等体积混淆,混匀;

0.1mol/L的盐酸溶液:取8.3mL盐酸溶液(36%-38%),用水定容到1000mL的容量瓶中,混匀;

0.1%苯酚的6mol/L的盐酸溶液:移取20μL苯酚,参加20mL6mol/L盐酸溶液中,混匀。

2.2 混淆尺度品溶液的配制

正确称量赖氨酸、蛋氨酸尺度尺度品配制成2.5μmol/mL的赖氨酸、蛋氨酸尺度溶液,用0.1mol/L的盐酸溶液浓缩成2.5、1.25、0.5、0.25、0.125μmol/mL系列浓度绘制尺度曲线,4℃冷藏保管。


2.3 衍生试剂的配制

三乙胺溶液:正确汲取1.4mL三乙胺至10mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,即得;

异硫氰酸苯酯溶液:正确移取250μL异硫氰酸苯酯至10mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,即得。


3.样品处置

3.1 前处置

正确称取0.1000g样品于50mL圆底烧瓶中,参加10mL0.1%苯酚溶液消融,110℃条件下加热回流24h,反响完成后,冷却,转移到100mL容量瓶中,定容。量取50mL溶液蒸干,用水定容至2mL,待衍生。


3.2 衍生反响

正确量打水解后溶液及氨基酸尺度品0.2mL,辨别置于1.5mL离心管中(内标法需往每支离心管中正确参加正亮氨酸内标50μL),然后辨别参加三乙胺乙腈溶液0.1mL和异硫氰酸苯酯乙腈溶液0.1mL,摇匀室温静置衍生1小时。衍生完毕后辨别参加0.4mL正己烷,密封后猛烈振荡5~10s,静置分层,取0.2mL上层溶液和0.8mL水混淆,过0.45μm无机系针式过滤器,待上机剖析。


四、实行后果

1.标样谱图


2.样品谱图


3.尺度曲线

蛋氨酸尺度曲线

y=289746.8125x-8752.5,R=0.9996


赖氨酸尺度曲线


y=478883.6875x-426.25,R=0.9998


4.后果盘算

备注:


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